Description du produit Activité biologique PF-06463922 démontre une activité cellulaire significative contre ALK et un grand nombre de mutations cliniques d'ALK avec une IC50 allant de 0,2 nM à 77 nM. [1] PF-06463922 inhibe significativement la prolifération cellulaire et induit l'apoptose cellulaire dans les cellules NSCLC humaines HCC78 hébergeant des fusions SLC34A2-ROS1 et les cellules BaF3-CD74-ROS1 exprimant CD74-ROS1 humain. PF-06463922 présente également une puissante activité inhibitrice de croissance et induit l'apoptose dans les cellules NSCLC hébergeant des fusions ALK non mutantes ou mutantes ALK. Chez le rat, le PF-06463922 présente une faible clairance plasmatique, un volume de distribution modéré, une demi-vie raisonnable, une faible propension à l'efflux médié par la glycoprotéine 1 et une biodisponibilité de 100 %. In vivo, PF-06463922 montre une efficacité antitumorale cytoréductrice dans les modèles de xénogreffes NIH3T3 exprimant CD74-ROS1 et Fig-ROS1 humains via l'inhibition de la phosphorylation de ROS1 et des molécules de signalisation en aval, ainsi que l'inhibition de la protéine du cycle cellulaire Cycline D1 dans les tumeurs. In vivo, PF-06463922 démontre également une activité antitumorale marquée chez des souris porteuses de xénogreffes tumorales exprimant EML4-ALK, EML4-ALK-L1196M, EML4-ALK-G1269A, EML4-ALK-G1202R ou NPM-ALK.
Dosages biochimiques de la kinase Les protéines du domaine kinase ALK de type sauvage et mutantes humaines (acides aminés 1093–1411) sont produites en interne à l'aide de l'expression baculovirale, préactivées par autophosphorylation avec MgATP et testées pour l'activité kinase à l'aide d'un test de déplacement de mobilité microfluidique. Les réactions contenaient 1,3 nM d'ALK de type sauvage ou 0,5 nM d'ALK mutante (appropriée pour produire 15 à 20 % de phosphorylation du substrat peptidique après 1 h de réaction), 3 M de 5-FAM-KKSRGDYMTMQIG-CONH2), 5 mM de MgCl2 et le Niveau Km d'ATP dans 25 mM d'Hepes, pH 7,1.
Les inhibiteurs se sont révélés compétitifs pour l'ATP d'après des études cinétiques et cristallographiques. Les valeurs Ki sont calculées en ajustant la conversion (%) à une équation d'inhibition compétitive. L'enzyme ROS1 est dosée comme décrit ci-dessus pour ALK, sauf en utilisant 0,25 nM de domaine catalytique ROS1 humain recombinant (acides aminés 1883-2347). La sélectivité de l'inhibiteur de kinase est évaluée à l'aide d'un panel de 206 kinases.

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