Description du produit .cp_wz table {border-top : 1px solide #ccc;border-left:1px solide #ccc ; } .cp_wz table td{border-right : 1px solide #ccc ; border-bottom : 1px solide #ccc ; remplissage : 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right : 1px solid #ccc;border-bottom : 1px solid #ccc ; rembourrage : 5px 0px 0px 5px ;}
Poids moléculaire :
340,38 NVP-BVU972 est un inhibiteur Met sélectif et puissant avec une CI50 de 14 nM.
Activité biologique NVP-BVU972 inhibe puissamment la kinase MET mais affiche une faible inhibition contre d'autres kinases y compris la kinase RON la plus proche avec des valeurs IC50 de plus de 1000 nM. NVP-BVU972 supprime également la phosphorylation MET constitutive dans les cellules GTL-16 ou la phosphorylation MET stimulée par HGF dans les cellules A549 avec des valeurs IC50 de 7,3 nM et 22 nM, respectivement. NVP-BVU972 empêche puissamment la croissance des lignées cellulaires amplifiées par le gène MET GTL-16, MKN-45 et EBC-1 avec des valeurs IC50 de 66 nM, 82 nM et 32 ​​nM, respectivement. Conformément à leur fréquence élevée dans le criblage NVP-BVU972, les mutations Y1230 et D1228 donnent lieu à des changements spectaculaires dans les valeurs IC50 mesurées pour NVP-BVU972 dans la lignée cellulaire BaF3. La résistance déclenchée par V1155L est plus limitée à NVP-BVU972. Une réduction dose-dépendante de la phosphorylation de TPR-MET lors de l'application de NVP-BVU972 à des cellules BaF3 exprimant TPR-MET de type sauvage. Les mutations Y1230H et D1228A ont abrogé l'effet de NVP-BVU972 mais pas d'AMG 458. Cependant, F1200I et L1195V interfèrent avec la puissance de NVP-BVU972 pour empêcher la phosphorylation de TPR-MET. Test biochimique TR-FRET avec MET de type sauvage et mutants L'activité enzymatique est mesurée dans un test de transfert d'énergie par résonance de fluorescence à résolution temporelle (TR-FRET), détectant la phosphorylation de la tyrosine avec un anticorps anti-phospho-tyrosine marqué à l'Eu (donneur de fluorescence) et l'allophycocyanine conjugué à la streptavidine (accepteur de fluorescence) qui se lie à une biotine sur le peptide substrat. Pour chaque variante, les concentrations de Km pour l'ATP sont déterminées en l'absence de NVP-BVU972, et la concentration d'ATP dans la réaction de kinase est fixée à Km (4 M pour MET wt, 1 M pour MET Y1230H et MET F1200I). NVP-BVU972 est dissous et dilué dans du DMSO et dosé en quadruple. Les réactions de kinase sont réalisées dans 50 mM de Tris-HCl pH 7,5, 8 mM de MgCl2, 4 mM de MnCl2, 0,05 % de Tween 20, 0,05 % d'albumine de sérum bovin, 0,1 mM d'EDTA, 1 mM de DTT, 0,1 mM de Na3VO4, dans des plaques blanches de 1536 puits. à température ambiante. NVP-BVU972 et l'enzyme sont incubés dans un volume de 2 L pendant 20 min, suivis de l'ajout de 1 L d'ATP et 1 L de substrat peptidique biotinylé (PTK1) aux concentrations finales de Km et 1 M, respectivement. Les concentrations d'enzymes dans les réactions sont de 5 nM pour le poids MET et de 4 nM pour les variantes F1200I et Y1230H. Après 90 min, les réactions sont arrêtées par l'ajout de 1 L de solution d'arrêt/détection pour atteindre des concentrations finales de 10 mM d'EDTA, 3,5 nM d'anticorps antiphospho-tyrosine PY20 marqué à l'Eu et 10 nM de streptavidine allophycocyanine. Le transfert d'énergie de résonance de fluorescence résolu dans le temps est mesuré dans un lecteur de plaques Envision (excitation 320 nm, émission 615 nm et 665 nm). Méthode Des cellules BaF3 contenant TPR-MET ou divers mutants de celle-ci sont cultivées dans un milieu RPMI 1640 contenant 10 % de sérum de veau foetal. Pour le maintien des cellules BaF3 parentales, le milieu est en outre complété par 10 ng/mL d'interleukine-3 (IL-3). Pour les tests de prolifération, les cellules BaF3 sont ensemencées sur des plaques à 96 puits en triple à 104 cellules par puits et incubées avec diverses concentrations de NVP-BVU972 pendant 72 heures, suivies d'une quantification des cellules viables à l'aide d'une lecture de réduction de colorant de sel de sodium de résazurine. Les valeurs IC50 sont déterminées avec le complément XLFit Excel en utilisant un modèle dose-réponse à 4 paramètres.

Groupes de Produits : Protéine Tyrosine Kinase > Inhibiteur c-Met