Description du produit .cp_wz table {border-top : 1px solide #ccc;border-left:1px solide #ccc ; } .cp_wz table td{border-right : 1px solide #ccc ; border-bottom : 1px solide #ccc ; remplissage : 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right : 1px solid #ccc;border-bottom : 1px solid #ccc ; rembourrage : 5px 0px 0px 5px ;}
Poids moléculaire :
460,57 Milciclib (PHA-848125) est un puissant inhibiteur de CDK compétitif avec l'ATP pour CDK2 avec une CI50 de 45 nM. Il est > 3 fois plus sélectif pour CDK2 que CDK1, 2, 4, 5 et 7. Phase 2.
Activité biologique Le PHA-848125 inhibe, bien qu'avec une puissance inférieure, les activités de la cycline H/CDK7, de la cycline D1/ CDK4, p35/CDK5, ainsi que la cycline E/CDK2 et la cycline B/CDK1 avec des valeurs IC50 de 0,15, 0,16, 0,265, 0,363, 0,398 M, respectivement. La kinase A du récepteur de la thropomyosine est également inhibée par le PHA-848125 dans la même gamme nanomolaire que les CDK. Dans la lignée cellulaire la plus sensible au PHA-848125, le PHA-848125 induit un arrêt G(1) dépendant de la concentration. Le PHA-848125 altère également la phosphorylation de la protéine du rétinoblastome aux sites spécifiques de CDK2 et CDK4, réduit les niveaux de protéine de rétinoblastome et de cycline A et augmente l'expression de p21(Cip1), p27(Kip1) et p53. Le PHA-848125 est ajouté aux cellules 48h après TMZ et la croissance cellulaire est évaluée après 3 jours supplémentaires de culture. Une combinaison médicamenteuse de TMZ, BG et PHA-848125 induit un effet additif ou synergique sur la croissance cellulaire, selon la lignée cellulaire. En l'absence de BG, l'association est encore plus active que les agents seuls dans les lignées cellulaires modérément sensibles au TMZ, mais comparable au PHA-848125 seul dans les deux lignées cellulaires résistantes au TMZ. Lorsque TMZ plus BG sont utilisés en combinaison avec PHA-848125 contre des mélanocytes normaux en culture, aucun effet antiprolifératif synergique ou additif n'est observé. Dans le modèle préclinique de carcinome ovarien humain xénogreffe A2780, le PHA-848125 révèle une bonne efficacité et est bien toléré lors de traitements quotidiens répétés. Le traitement de souris K-Ras(G12D)LA2 avec PHA-848125 (40 mg/kg deux fois par jour pendant 10 jours) entraîne une inhibition significative de la croissance tumorale à la fin du traitement et s'accompagne d'une réduction du renouvellement de la membrane cellulaire. D'autre part, après administration orale, le PHA-848125 présente une activité antitumorale significative dans diverses xénogreffes humaines, des tumeurs induites par des cancérogènes et dans des modèles de leucémie primaire disséminée ; les concentrations plasmatiques chez les rongeurs étant du même ordre que celles trouvées inhibant la prolifération des cellules cancéreuses. Protocole (uniquement pour référence) Dosage de la kinase : [4]

Biochemical kinase inhibition assays

Inhibition of kinase activity by PHA-848125 is assessed using a strong anion exchanger (Dowex 1X8 resin)–based assay in robotized format run on 384-well plates. In this assay, specific peptides or protein substrates are transphosphorylated by their specific kinase in the presence of ATP traced with [γ-33P]ATP using optimal buffers and cofactors. The potency of PHA-848125 toward CDKs and 38 additional kinases belonging to an in-house Kinase Selectivity Screening panel is evaluated, and the relevant IC50s are determined. For each enzyme, the absolute KM values for ATP and the specific substrate are calculated and each assay is then run at optimized ATP (2KM) and substrate (5KM) concentrations. This setting enables direct comparison of IC50 values of PHA-848125 across the panel for evaluation of its biochemical profile.

Dosage cellulaire : [1]

Cell lines	Melanoma cells
Concentrations	5.7 mg/mL
Incubation Time	2 hours
Method	Melanoma cells are suspended in culture media at a concentration of 2 × 104 cells/mL, dispensed in 50 μL aliquots into flat-bottom 96-well plates and allowed to adhere overnight at 37 °C. Graded amounts of PHA-848125 or TMZ are then added to the wells (4 wells per point) in 50 μL of CM and the plates are incubated at 37 °C in a 5% CO2 humidified atmosphere for 5 days. The cytotoxic effects of TMZ are also evaluated in combination with the MGMT inhibitor BG. To this end, 10 μM BG is added to the plates 2 hours before TMZ and left in culture for the entire period of cell exposure to the drug. ContS1017rol groups are represented by untreated cells and cells treated with BG or DMSO alone. The growth of the cells treated with BG or DMSO alone does not differ from that of untreated cells. MGMT activity of BG-treated cells is undetectable 2 hours after the addition of the inhibitor PHA-848125 and remained essentially undetectable up to the end of the assay. Normal melanocytes are suspended in MGM at the concentration of 1.6 × 105 cells/mL, plated (50 μL/well) and exposed to TMZ + BG or to PHA-848125 as described for melanoma cells. At the end of the incubation period, cell growth is evaluated by the MTT assay. Briefly, 0.1 mg of MTT (in 20 μL of PBS) is added to each well and cells are incubated at 37 °C for 4 hours. Cells are then lysed with a buffer (0.1 mL/well) containing 20% SDS and 50% N,N-dimethylformamide, pH 4.7. After overnight incubation, the absorbance is read at 595 nm using a 3550-UV microplate reader. Cell sensitivity to drug treatment is expressed in terms of IC50 (drug concentration producing 50% inhibition of cell growth, calculated on the regression line in which absorbance values at 595 nm are plotted against the logarithm of drug concentration).

Étude animale : [3]

Animal Models	K-Ras(G12D)LA2 mice
Formulation	5% dextrose solution
Dosages	40 mg/kg twice daily for 10 days
Administration	Oral administration
Solubility	30% propylene glycol, 5% Tween 80, 65% D5W, 30 mg/mL
* Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.

Conversion de différents animaux modèles sur la base de la BSA (valeur basée sur les données des lignes directrices provisoires de la FDA)

Species	Baboon	Dog	Monkey	Rabbit	Guinea pig	Rat	Hamster	Mouse
Weight (kg)	12	10	3	1.8	0.4	0.15	0.08	0.02
Body Surface Area (m2)	0.6	0.5	0.24	0.15	0.05	0.025	0.02	0.007
Km factor	20	20	12	12	8	6	5	3

Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by	Animal B Km
	Animal A Km

Par exemple, pour modifier la dose de resvératrol utilisée pour une souris (22,4 mg/kg) à une dose basée sur la BSA pour un rat, multiplier 22,4 mg/kg par le facteur Km pour une souris puis diviser par le facteur Km pour un rat. Ce calcul donne une dose équivalente chez le rat pour le resvératrol de 11,2 mg/kg.

Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×	mouse Km(3)	= 11.2 mg/kg
	rat Km(6)

Informations chimiques

Molecular Weight (MW)	460.57
Formula	C25H32N8O
CAS No.	802539-81-7

Storage	3 years -20℃Powder
	6 months-80℃in solvent (DMSO, water, etc.)
Synonyms

Solubility (25°C) *	In vitro	DMSO	92 mg/mL (199.75 mM)
		Water	<1 mg/mL (
		Ethanol	<1 mg/mL (
	In vivo	30% propylene glycol, 5% Tween 80, 65% D5W	30 mg/mL
* <1 mg/ml means slightly soluble or insoluble. * Please note that Selleck tests the solubility of all compounds in-house, and the actual solubility may differ slightly from published values. This is normal and is due to slight batch-to-batch variations.

Chemical Name	N,1,4,4-tetramethyl-8-(4-(4-methylpiperazin-1-yl)phenylamino)-4,5-dihydro-1H-pyrazolo[4,3-h]quinazoline-3-carboxamide

Calculateur de molarité Calculateur de dilution Calculateur de poids moléculaire

Groupes de Produits : Cycle cellulaire > Inhibiteur CDK