Description du produit .cp_wz table {border-top : 1px solide #ccc;border-left:1px solide #ccc ; } .cp_wz table td{border-right : 1px solide #ccc ; border-bottom : 1px solide #ccc ; remplissage : 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right : 1px solid #ccc;border-bottom : 1px solid #ccc ; rembourrage : 5px 0px 0px 5px ;}
Poids moléculaire :
503.48 NVP-BHG712 est un inhibiteur spécifique d'EphB4 avec une DE50 de 25 nM qui fait la distinction entre l'inhibition de VEGFR et d'EphB4 ; montre également une activité contre c-Raf, c-Src et c-Abl avec une CI50 de 0,395 M, 1,266 M et 1,667 M, respectivement.
Activité biologique Le traitement par NVP-BHG712 entraîne également, en fonction de la dose, l'inhibition de l'autophosphorylation de RTK chez les transfectés stables Cellules de mélanome A375 avec EC50 de 25 nM et 4,2 M pour EphB4 et VEGFR2, respectivement. Dans un modèle d'angiogenèse induite par un facteur de croissance, NVP-BHG712 (3 mg/kg, po) supprime de manière significative la formation et la vascularisation des tissus stimulés par le VEGF en inhibant la signalisation directe EphB4. De plus, NVP-BHG712 (10 mg/kg/kg, po) inverse puissamment la formation tissulaire et la croissance des vaisseaux améliorées par le VEGF. NVP-BHG712 (3 mg/kg, po) montre une exposition de longue durée avec des concentrations d'environ 10 M dans le plasma ainsi que dans les tissus pulmonaires et hépatiques jusqu'à 8 heures, et entraîne ainsi une inhibition durable de l'activité de la kinase EphB4 dans souris.
Tests de kinase in vitro Tous les tests de kinase in vitro sont effectués avec des kinases purifiées recombinantes achetées auprès de fournisseurs externes ou produites en interne. Pour estimer l'activité kinase à la fois, LanthaScreenTM basé sur TR-FRET et le décalage de mobilité Caliper sont utilisés. En bref, la technologie de dosage LanthaScreenTM est basée sur la discrimination entre le substrat non phosphorylé et le produit phosphorylé par un anticorps phospho-spécifique, se liant uniquement à la version phosphorylée du substrat. L'anticorps et le substrat portent tous deux des marqueurs fluorescents et la proximité des marqueurs dans le complexe formé permet la mesure d'un signal de transfert d'énergie de résonance de fluorescence (FRET). La lecture du signal FRET d'une manière dépendante du temps/dépendant du temps améliore encore les performances du test en réduisant la fluorescence de fond. Pour les mesures dose-réponse, NVP-BHG712 est pré-dilué dans 90 % de DMSO et 50 nL de solutions de composés sont distribués directement dans la plaque de dosage vide à l'aide d'un nanodistributeur HummingBird. Les réactions de kinase sont déclenchées par l'ajout de 4,5 L de solution d'ATP (4 M d'ATP, 20 mM de Tris/HCL, 1 mM de DTT, 0,03 % de Tween20, 0,01 mM de Na3VO4) et 4,5 L de mélange enzyme/substrat (100 nM de fluorescéine poly-GAT) , 0,5 % d'albumine de sérum bovin, 20 mM de Tris/HCL, 1 mM de DTT, 0,03 % de Tween20, 0,01 mM de Na3VO4). D'autres composants du mélange enzyme/substrat sont les enzymes ainsi que MgCl2/MnCl2 qui sont adaptés spécifiquement aux exigences de l'enzyme individuelle. Après 60 minutes d'incubation à température ambiante, les réactions de kinase sont arrêtées par l'ajout de 4,5 L de solution d'arrêt (50 mM EDTA pH 8,0, 0,04 % NP-40, 20 mM Tris/HCl pH 7,4) suivi de 4,5 L de mélange de détection (1,72 g /mL d'anticorps Tb-PY20), 1 % d'albumine de sérum bovin, 20 mM de Tris/HCl, 1 mM de DTT, 0,03 % de Tween20, 0,01 mM de Na3VO4). Après incubation pendant 45 minutes à température ambiante, les plaques sont analysées dans un lecteur de plaques BMG PHERAstar. Dans les tests de déplacement de mobilité Caliper, les réactions de kinase sont analysées par électrophorèse capillaire microfluidique. Le transfert de phosphate de l'ATP à un peptide court par une kinase provoque une modification de la charge nette du peptide de -2. La différence de charge entre les entités non phosphorylées et phosphorylées du peptide peut être séparée dans un champ électrique. L'utilisation de peptides attachés avec un marqueur fluorescent permet la détection et la quantification des deux formes et donc le calcul du chiffre d'affaires de la réaction. Pour les mesures dose-réponse, NVP-BHG712 est pré-dilué dans 90 % de DMSO et des aliquotes de 50 nL de solution sont distribuées directement dans la plaque de dosage vide à l'aide d'un nanodistributeur HummingBird. Les réactions de kinase sont démarrées par l'ajout de 4,5 L de substrat composé d'ATP et de substrat peptidique dans un tampon de dosage (50 mM HEPES pH 7,5, 0,02 % d'albumine de sérum bovin, 1 mM de DTT, 0,02 % de Tween20, 0,01 mM de Na34, 10 mM de bêta- glycérophosphate) et 4,5 L de solution enzymatique dans le tampon de dosage. La concentration en peptide est de 2 µM dans les dosages. Les concentrations pour l'enzyme, ainsi que pour MgCl2 et MnCl2 sont ajustées spécifiquement aux exigences de l'enzyme individuelle. Les concentrations d'ATP sont ajustées aux valeurs Km de l'enzyme spécifique. Après incubation pendant 60 minutes à 30 °C, les réactions de kinase sont arrêtées par l'ajout de 16 L de solution d'arrêt (100 mM HEPES pH 7,5, 5% DMSO, 0,1% réactif d'enrobage 10 mM EDTA pH 8,0, 0,015% BRIJ35). Les réactions de kinase arrêtées sont analysées dans un lecteur LC3000.

Groupes de Produits : Protéine Tyrosine Kinase > Inhibiteur des récepteurs d'éphrine