Description du produit .cp_wz table {border-top : 1px solide #ccc;border-left:1px solide #ccc ; } .cp_wz table td{border-right : 1px solide #ccc ; border-bottom : 1px solide #ccc ; remplissage : 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right : 1px solid #ccc;border-bottom : 1px solid #ccc ; rembourrage : 5px 0px 0px 5px ;}
Poids moléculaire :
529,72 UNC1215 est un antagoniste MBT (tumeur cérébrale maligne) puissant et sélectif, qui se lie à L3MBTL3 avec une IC50 de 40 nM et un Kd de 120 nM, 50 fois sélectif par rapport aux autres membres de la famille MBT humaine.
Activité biologique
UNC1215 se lie à L3MBTL3, déplaçant de manière compétitive les peptides contenant de la mono- ou de la diméthyllysine. Cette sonde est plus de 50 fois sélective par rapport aux autres membres de la famille MBT humaine. UNC1215 a une sélectivité d'environ 75 fois pour L3MBTL3 par rapport à L3MBTL1. UNC1215 ne montre aucune activité à des concentrations allant jusqu'à 30 M contre le domaine Tudor tandem de UHRF1, le chromodomaine de CBX7 ou le domaine PHD de JARID1A. La cristallographie aux rayons X identifie un mode unique d'interaction polyvalent 2:2 entre UNC1215 et L3MBTL3. Dans les cellules, UNC1215 est non toxique et se lie directement à L3MBTL3 via la poche de liaison à Kme des domaines MBT. UNC1215 augmente la mobilité cellulaire des protéines de fusion GFP-L3MBTL3 et des mutants ponctuels qui perturbent la fonction de liaison à Kme de GFP-L3MBTL3 phénocopient les effets d'UNC1215 sur la localisation. UNC1215 est utilisé pour révéler une nouvelle interaction Kme-dépendante de L3MBTL3 avec BCLAF1, une protéine impliquée dans la réparation des dommages à l'ADN et l'apoptose.
Test AlphaScreen Les plaques composées (1 L à la concentration la plus élevée de 10 ou 30 mM) sont diluées dans 1 x tampon de test (20 mM Tris pH 8,0, 25 mM NaCl, 2 mM DTT et 0,05% Tween-20) en 2 étapes à l'aide d'un Une pipette robotisée Multimek et 1 L sont déposés dans les puits des Proxiplates d'essai à 384 puits. A ces plaques, 9 L de mélange protéine-peptide dans du tampon de dosage 1X sont ajoutés par Multidrop et incubés pendant 30 min à température ambiante. À ce stade, 2 L de billes de donneur conjugué à la streptavidine et d'accepteur de nickel-chélate (45 g/mL dans du tampon d'essai 1 x) sont ajoutés, les plaques sont laissées à incuber pendant 30 minutes supplémentaires dans l'obscurité à température ambiante. Après incubation, les plaques sont lues sur un lecteur EnVision mulilabel équipé d'un laser écran HTS alpha. Les criblages rapportés sont réalisés jusqu'à 10 ou 30 µM, et il est donc à noter que les composés dits inactifs ne sont bien inactifs que dans la gamme de concentration testée. PHF23 et JARID1A sont marqués GST et par conséquent, pour ces dosages, des billes accepteurs GST sont utilisées. Il convient de noter que toutes les courbes de liaison positives pour L3MBTL4 qui sont générées ont donné des courbes avec des pentes très faibles, suggérant une interaction non spécifique. Les données pour les valeurs IC50 sont calculées à partir d'essais répétés en ce sens que les points de données pour chaque concentration de composé sont moyennés et tracés à l'aide d'un ajustement de courbe à 4 paramètres.

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