Description du produit .cp_wz table {border-top : 1px solide #ccc;border-left:1px solide #ccc ; } .cp_wz table td{border-right : 1px solide #ccc ; border-bottom : 1px solide #ccc ; remplissage : 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right : 1px solid #ccc;border-bottom : 1px solid #ccc ; rembourrage : 5px 0px 0px 5px;}
Poids moléculaire :
469,53 CP-724 714 est un inhibiteur sélectif puissant de HER2/ErbB2 avec IC50 de 10 nM, sélectivité >640 fois contre EGFR, InsR, IRG-1R, PDGFR , VEGFR2, Abl, Src, c-Met etc. Phase 2.
Activité biologique CP-724 714 est marqué sélectivement contre l'EGFR avec une CI50 de 6,4 M. CP-724 714 est > 1 000 fois moins puissant pour les IR, IGF-1R, PDGFRβ, VGFR2, abl. Src, c-Met c-jun kinase NH2-terminale (JNK)-2, JNK-3, ZAP-70, kinase dépendante de la cycline (CDK)-2 et CDK-5. CP-724 714 réduit puissamment l'autophosphorylation induite par l'EGF de la chimère contenant le domaine kinase erbB2 avec une CI50 de 32 nM, mais est nettement moins puissant contre l'EGFR dans les cellules NIH3T3 transfectées. CP-724 714 inhibe de manière sensible la prolifération des cellules amplifiées par erbB2, y compris BT-474 et SKBR3, avec une CI50 de 0,25 et 0,95 M. CP-724 714 induit l'accumulation de cellules en phase G1 et une réduction marquée de la phase S dans les cellules BT-474 à 1 M. CP-724 714 exerce probablement son hépatotoxicité via à la fois une lésion hépatocellulaire et des mécanismes cholestatiques hépatobiliaires. CP-724 714 affiche une inhibition de l'efflux de cholyl-lysyl fluorescéine et de taurocholate (TC) dans les canalicules dans les hépatocytes humains cryoconservés et frais cultivés, respectivement. CP-724 714 inhibe le transport de TC dans les vésicules membranaires exprimant la pompe d'exportation de sels biliaires humains avec une CI50 de 16 M et inhibe le principal transporteur d'efflux dans les canalicules biliaires, MDR1, avec une CI50 d'environ 28 M. Le CP-724 714 (25 mg/kg) est rapidement absorbé après administration po et provoque une réduction de la phosphorylation du récepteur erbB2 tumoral après administration dans des xénogreffes FRE-erbB2 ou BT-474. CP-724 714 induit l'apoptose chez les souris porteuses de xénogreffe FRE-erbB2 (sc) et montre une inhibition de la croissance tumorale de 50 % à 50 mg/kg, sans perte de poids ni mortalité. CP-724 714 a également une grande activité antitumorale dans les xénogreffes MDA-MB-453, MDA-MB-231, LoVo (côlon) et Colo-205 (côlon). De plus, CP-724 714 (30 ou 100 mg/kg) réduit la kinase régulée par le signal extracellulaire et la phosphorylation d'Akt dans les xénogreffes BT-474.
Dosages de kinase Les domaines intracellulaires recombinants erbB2 (résidus d'acides aminés 675-1255) et EGFR (résidus d'acides aminés 668-1211) sont exprimés dans des cellules Sf9 infectées par le baculovirus en tant que protéines de fusion glutathion S-transférase. Les protéines sont purifiées par chromatographie d'affinité sur des billes de glutathion Sepharose pour être utilisées dans le dosage. Les plaques 96 puits Nunc MaxiSorp sont recouvertes par incubation pendant une nuit à 37 °C avec 100 L/puits de 0,25 mg/mL de poly(Glu:Tyr, 4:1), PGT dans du PBS. L'excès de PGT est éliminé par aspiration et la plaque est lavée 3 fois avec du tampon de lavage (0,1 % de Tween 20 dans du PBS). La réaction de kinase est réalisée dans 50 L d'HEPES 50 mm (pH 7,4) contenant 125 mm de chlorure de sodium, 10 mm de chlorure de magnésium, 0,1 mm d'orthovanadate de sodium, 1 mm d'ATP et ∼15 ng de protéine recombinante. Des inhibiteurs dans le DMSO sont ajoutés; la concentration finale en DMSO est de 2,5 %. La phosphorylation est initiée par addition d'ATP et se déroule pendant 6 min à température ambiante, sous agitation constante. La réaction de kinase est terminée par aspiration du mélange réactionnel et lavage quatre fois avec du tampon de lavage. La PGT phosphorylée est mesurée après une incubation de 25 min avec 50 µL/puits d'anticorps antiphosphotyrosine conjugué HRP-PY54 dilué à 0,2 µg/mL dans du tampon de blocage (3 % BSA, 0,05 % Tween 20 en PBS). L'anticorps est éliminé par aspiration et la plaque est lavée quatre fois avec du tampon de lavage. Le signal colorimétrique est développé par ajout de 50 L/puits de Tetramethylbenzidine Microwell Peroxydase Substrate et stoppé par l'ajout de 50 μL/puits d'acide sulfurique 0,09 m. Le produit phosphotyrosine formé est estimé par mesure d'absorbance à 450 nm. Le signal pour les contrôles est généralement de A0,6 à 1,2, avec essentiellement aucun bruit de fond dans les puits sans ATP, protéine kinase ou PGT, et est proportionnel au temps d'incubation pendant 6 min.
Méthode Les cellules sont ensemencées en double à 5 ~ 10 × 103 par puits dans des plaques à 24 puits. Le lendemain de l'étalement, CP-724 714 est ajouté par titrage sur six dilutions ou plus de 0,1 nM à 10 M. Des puits témoins sans CP-724 714 sont également ensemencés. Les cellules sont cultivées pendant 6 à 7 jours, moment auquel les cellules survivantes sont comptées. Après trypsinisation, les cellules sont placées dans une solution d'isotone et comptées immédiatement à l'aide d'un compteur de particules Coulter Z2. L'inhibition de la croissance est calculée [(1- valeur expérimentale / valeur témoin) × 100] pour chaque concentration. Les courbes dose-réponse sont répétées au moins deux fois et moyennées. Les valeurs IC50 sont calculées à l'aide du logiciel Calcusyn.

Groupes de Produits : Protéine Tyrosine Kinase > Inhibiteur HER2