Description du produit .cp_wz table {border-top : 1px solide #ccc;border-left:1px solide #ccc ; } .cp_wz table td{border-right : 1px solide #ccc ; border-bottom : 1px solide #ccc ; remplissage : 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right : 1px solid #ccc;border-bottom : 1px solid #ccc ; rembourrage : 5px 0px 0px 5px;}
Poids moléculaire :
635,93 UNC0631 est un puissant inhibiteur de l'histone méthyltransférase G9a avec une CI50 de 4 nM.
Activité biologique Dans les cellules MCF7, 22RV1 et IMR90, UNC0631 réduit puissamment les niveaux de H3K9me2 et montre une excellente séparation entre la puissance fonctionnelle et la toxicité cellulaire. UNC0631 peut donc être utilisé comme un outil pour la communauté de recherche biomédicale afin d'approfondir l'étude de la biologie du G9a et de son rôle dans le remodelage de la chromatine. Dosages couplés au SAHH Ce dosage utilise le SAHH pour hydrolyser le produit de transfert de méthyle SAH en homocystéine et en adénosine en présence d'adénosine désaminase qui convertit l'adénosine en inosine. La concentration d'homocystéine est ensuite déterminée par conjugaison de sa fraction sulfhydryle libre à un fluorophore sensible au thiol, ThioGlo. Pour les déterminations IC50, les mélanges d'essai sont préparés dans 25 mM de tampon phosphate de potassium pH 7,5, 1 mM d'EDTA, 2 mM de MgCl2, 0,01 % de Triton X-100 avec 5 M de SAHH, 0,3 U/mL d'adénosine désaminase, 25 M de SAM et 15 M ThioGlo. G9a, GLP, SETD7, SETD8, PRMT3 et SUV39H2 sont dosés respectivement à 25 nM, 100 nM, 200 nM, 250 nM, 500 nM et 100 nM. Les inhibiteurs sont ajoutés à des concentrations allant de 4 nM à 16 µM. Après 2 min d'incubation, les réactions sont initiées par l'ajout des peptides d'histone : 10 M H3(1–25) pour G9a, 20 M H3(1–25) pour BPL, 100 M H3(1–25) pour SETD7, 500 M H4(1–24) pour SETD8, 10 M H4(1–24) pour PRMT3 et 200 M H3K9Me1 (1–15) pour SUV39H2. La réaction de méthylation est suivie en surveillant l'augmentation de la fluorescence à l'aide d'un lecteur de plaques Biotek Synergy2 avec filtre d'excitation 360/40 nm et filtre d'émission 528/20 nm pendant 20 min dans un format de plaque à 384 puits. Les valeurs d'activité sont corrigées en soustrayant le bruit de fond causé par le peptide ou la protéine. Les valeurs IC50 sont calculées à l'aide de Sigmaplot. Les écarts types sont calculés à partir de deux expériences indépendantes. Méthode Les cellules MDA-MB-231, PC3, HCT116 sont cultivées en RPMI avec 10 % de FBS, les cellules 22RV1 en alphaMEM et 10 % de cellules FBS, MCF7 et IMR90 en DMEM avec 10 % de FBS. Les cellules sont traitées avec des inhibiteurs pendant 48 h. Le milieu est retiré et remplacé par du DMEM 10 % FBS sans rouge de phénol additionné de 1 mg/mL de MTT et incubé pendant 1 à 2 h. Les cellules vivantes réduisent le MTT jaune au formazan violet. Les formazanis résultants sont solubilisés dans de l'isopropanol acidifié et du Triton à 1 %. L'absorbance du signal formazan est mesurée à 570 nm et corrigée pour le bruit de fond de 650 nm. Les IC50 sont calculées à l'aide du progiciel statistique GraphPad Prizm avec un ajustement de la courbe dose-réponse à pente variable sigmoïde.

Groupes de Produits : Épigénétique > Inhibiteur de l'histone méthyltransférase