Description du produit .cp_wz table {border-top : 1px solide #ccc;border-left:1px solide #ccc ; } .cp_wz table td{border-right : 1px solide #ccc ; border-bottom : 1px solide #ccc ; remplissage : 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right : 1px solid #ccc;border-bottom : 1px solid #ccc ; rembourrage : 5px 0px 0px 5px ;}
Poids moléculaire :
390,48 EI1 est un inhibiteur EZH2 puissant et sélectif avec une CI50 de 15 nM et 13 nM pour EZH2 (WT) et EZH2 (Y641F), respectivement.
Activité biologique Dans les cellules DLBCL, EI1 inhibe la méthylation cellulaire de H3K27 et active l'expression du gène cible Ezh2 p16. Dans les fibroblastes embryonnaires de souris, EI1 inhibe également H3K27me3 et la prolifération cellulaire. De plus, EI1 inhibe sélectivement la croissance des cellules DLBCL porteuses de la mutation Ezh2, et provoque l'arrêt du cycle cellulaire et l'apoptose. Dosage biochimique Pour la détermination de la CI50, EI1 est dilué en série trois fois dans du DMSO pour un total de 12 concentrations, avec la concentration de départ à 1 M. La réaction est incubée à température ambiante pendant 120 min, et arrêtée en ajoutant une solution de trempe (2,5% de TFA avec 320 nM de d4-SAH). La production de SAH est quantifiée à l'aide d'une spectrométrie de masse à triple quadripôle API 4000 avec Turbulon Spray couplée à Prominence UFLC. Le pourcentage d'inhibition est normalisé en utilisant des contrôles positifs (pas d'inhibiteur) et négatifs (pas d'enzyme), et la CI50 calculée en utilisant PRISM. Des études enzymologiques de la compétition S-Adénosyl méthionine (SAM) sont réalisées avec une légère modification des conditions réactionnelles : 10 M EI1 est utilisé comme dose de départ pour la dilution en série. SAM est titré sur une plage comprise entre 1 M et 50 M (correspondant à 1 × Km et 50 × Km), et le peptide substrat est présent dans le mélange réactionnel final à son état saturé (10 M). Pour le profilage de l'histone méthyltransférase (HMT) dans le tableau 1, toutes les HMT sont des protéines recombinantes purifiées provenant du système Escherichia coli ou Baculovirus. Le domaine catalytique de G9a, SuV39H2, Set7/9, CARM1, SETD8, NSD3, SETD2 et Dot1L, et la protéine SmyD2 pleine longueur ont été utilisés dans les dosages biochimiques. Les réactions biochimiques HMT sont soigneusement caractérisées avec des études enzymologiques et le SAM et le substrat Km déterminés. Les concentrations de SAM et de substrat sont maintenues à leur Km respectif pour la plupart des HMT, à l'exception de ceux (SmyD2 et Set7/9) avec une faible valeur SAM-Km, pour lesquels 0,5 M de SAM est utilisé. Toutes les réactions HMT sont effectuées en utilisant le même format de dosage où la production de SAH à partir de la réaction biochimique est quantifiée par LC-MS.
Méthode Des cellules de lymphome diffus à grandes cellules B (DLBCL) à croissance exponentielle sont ensemencées dans des plaques à 12 puits à une densité de 1 × 105 cellules/mL avec la concentration indiquée d'EI1. Le nombre de cellules viables est déterminé tous les 3 à 4 jours jusqu'à 14 ou 15 jours par Vi-CELL. Des fibroblastes embryonnaires de souris (MEF) sont ensemencés dans une plaque à six puits à 2,5 × 104 cellules/mL et traités avec EI1 (3,3 M) ou 4-OH-tamoxifène (100 nM). Le nombre de cellules viables est déterminé aux jours 3, 6 et 11. Les jours de dénombrement des cellules, le milieu de croissance frais et le composé sont réapprovisionnés et les cellules se divisent à nouveau à une densité de 1 × 105 cellules/mL. Le nombre total de cellules est exprimé en cellules viables ajustées par division par millilitre. IC50 est calculé par PRISM et toutes les expériences de prolifération sont répétées plus de deux fois et des données représentatives sont présentées.

Groupes de Produits : Épigénétique > Inhibiteur de l'histone méthyltransférase