Description du produit Poids moléculaire : 266,29 Tyrphostin AG 1296 est un inhibiteur du PDGFR avec une CI50 de 0,3-0,5 M, aucune activité vis-à-vis de l'EGFR.
Activité biologique AG 1296 inhibe sélectivement la kinase du récepteur PDGF et la synthèse d'ADN dépendante du PDGF dans les cellules Swiss 3T3 et chez le porc cellules endothéliales de l'aorte avec des concentrations inhibitrices de 50 % inférieures à 5 et 1 µM, respectivement. AG1296 inhibe le FGFR et le c-Kit avec une CI50 de 12,3 M et 1,8 M dans les cellules Swiss 3T3. AG1296 inhibe puissamment la signalisation des récepteurs humains PDGF -α et -β mais n'a aucun effet sur l'autophosphorylation du VEGFR KDR ou sur la synthèse d'ADN induite par le VEGF dans les cellules endothéliales aortiques porcines.
Le traitement par AG1296 inverse le phénotype transformé des cellules NIH 3T3 transfectées par sis mais n'a aucun effet sur les cellules NIH3T3 transformées par src. AG1296 est un inhibiteur compétitif de l'ATP. AG1296 n'interfère ni avec la liaison du PDGF ni avec la dimérisation du récepteur PDGF alors qu'il abolit l'autophosphorylation du récepteur PDGF. Ainsi, AG1296 est un pur inhibiteur de l'activité catalytique du récepteur tyrosine kinase. Essais d'autophosphorylation des membranes Les membranes sont préparées à partir de cultures confluentes de cellules Swiss 3T3 comme décrit. Pour mesurer l'autophosphorylation du récepteur, 10 µg de protéine membranaire par dosage sont incubés pendant 20 min sur de la glace en présence de 1,2 µg/mL d'EGF ou de 2 µg/mL de PDGF, ou les deux ; 50 mM d'Hepes (pH 7,5); et 3 mM de MnCl2 dans un volume de 45μl. Afin de tester les effets des tyrphostines, celles-ci sont ajoutées dans un volume de 0,5 µl (en DMSO ; concentration finale, 0,5 %) 15 min avant l'ajout des facteurs de croissance.
La phosphorylation est initiée par l'ajout de [γ-32P]ATP et terminée après 2 min par l'ajout de 10μL d'une solution contenant 6 % de SDS, 30 % de β-mercatoéthanol, 40 % de glycérol et 0,5 mg/mL de bleu de bromophénol. Les échantillons sont chauffés 5 min à 95 ℃ et soumis à une SDS-PAGE en utilisant des gels d'acrylamide à 10 %. Les gels sont colorés et séchés et soumis à une analyse autoradiographique. Méthode Les cellules sont ensemencées dans des plaques 24 puits (5000 cellules/puits) en DMEM/10% FCS. Le lendemain, le milieu est changé en DMEM/2% FcS avec ou sans facteurs de croissance et des tyrphostines sont ajoutées comme indiqué. Trois jours plus tard, les cellules sont comptées dans un hémocytomètre Conversion de différents animaux modèles sur la base de la BSA (valeur basée sur les données des directives provisoires de la FDA)

Species	Baboon	Dog	Monkey	Rabbit	Guinea pig	Rat	Hamster	Mouse
Weight (kg)	12	10	3	1.8	0.4	0.15	0.08	0.02
Body Surface Area (m2)	0.6	0.5	0.24	0.15	0.05	0.025	0.02	0.007
Km factor	20	20	12	12	8	6	5	3

Animal A (mg/kg) = Animal B (mg/kg) multiplied by	Animal B Km
	Animal A Km

Par exemple, pour modifier la dose de resvératrol utilisée pour une souris (22,4 mg/kg) à une dose basée sur la BSA pour un rat, multiplier 22,4 mg/kg par le facteur Km pour une souris puis diviser par le facteur Km pour un rat. Ce calcul donne une dose équivalente chez le rat pour le resvératrol de 11,2 mg/kg.

Rat dose (mg/kg) = mouse dose (22.4 mg/kg) ×	mouse Km(3)	= 11.2 mg/kg
	rat Km(6)

Groupes de Produits : Protéine Tyrosine Kinase > Inhibiteur du PDGFR