Description du produit .cp_wz table {border-top : 1px solide #ccc;border-left:1px solide #ccc ; } .cp_wz table td{border-right : 1px solide #ccc ; border-bottom : 1px solide #ccc ; remplissage : 5px 0px 0px 5px;} .cp_wz table th {border-right : 1px solid #ccc;border-bottom : 1px solid #ccc ; rembourrage : 5px 0px 0px 5px ;}
Poids moléculaire :
473,98 Le pazopanib (GW786034) est un nouvel inhibiteur multi-cibles de VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3, PDGFR, FGFR, c-Kit et c-Fms avec IC50 de 10 nM , 30 nM, 47 nM, 84 nM, 74 nM, 140 nM et 146 nM, respectivement.
Activité biologique Le pazopanib inhibe puissamment la phosphorylation de VEGFR2 induite par le VEGF dans les cellules HUVEC avec une CI50 de 8 nM. Le pazopanib présente une inhibition de la croissance dose-dépendante dans toutes les lignées cellulaires de sarcome synovial, y compris les cellules SYO-1 et HS-SY-II. La prolifération des cellules SYO-1 et HS-SY-II est inhibée même à 1 µg/mL de Pazopanib et est complètement abolie à 5 µg/mL. Le pazopanib induit un arrêt G1 et supprime ainsi la croissance des cellules du sarcome synovial. La phosphorylation d'Akts, GSK-3β, JNKs, p70 S6 Kinase et mTOR est supprimée dans les cellules SYO-1 traitées au Pazopanib par rapport à celle des cellules traitées avec le véhicule. Le pazopanib entre 20 mg/mL et 22,5 mg/mL montre une réduction croissante de la viabilité des cellules RPE. Les souris traitées avec 30 mg/kg ou 100 mg/kg de Pazopanib présentent une diminution significative de la charge tumorale par rapport aux souris traitées avec le véhicule ou 10 mg/kg de Pazopanib. Le traitement par Pazopanib est bien toléré et il n'y a pas de différence significative de poids corporel entre les souris de chaque groupe.
Dosages enzymatiques kinase Les dosages enzymatiques VEGFR pour VEGGR1, VEGFR2 et VEGFR3 sont exécutés dans un format de fluorescence homogène à résolution temporelle (HTRF) dans des plaques de microtitrage à 384 puits en utilisant une protéine de fusion glutathion-S-transférase (GST) purifiée exprimée par baculovirus codant pour l'extrémité c-terminale catalytique des récepteurs humains VEGFR kinases 1, 2 ou 3. Les réactions sont initiées par l'ajout de 10 L de solution de VEGFR2 kinase activée [concentration finale, 1 nM d'enzyme dans 0,1 M HEPES, pH 7,5, contenant 0,1 mg /mL d'albumine de sérum bovin (BSA), 300 M de dithiothréitol (DTT)] à 10 L de solution de substrat [concentration finale, 360 nM de peptide, (biotine-aminohexyl-EEEEYFELVAKKKK-NH2), 75 M d'ATP, 10 M de MgCl2] et 1 L de Pazopanib titré dans du DMSO. Les plaques sont incubées à température ambiante pendant 60 min, puis la réaction est stoppée par l'ajout de 20 µL d'acide éthylène diamine tétraacétique (EDTA) 100 mM. Après trempe, 20 L de réactifs HTRF (concentration finale, 15 nM d'allophycocyanine liée à la streptavidine, 1 nM d'anticorps antiphosphotyrosine marqué à l'Europium dilué dans 0,1 mg/mL de BSA, 0,1 M de HEPES, pH 7,5) sont ajoutés et les plaques incubées pendant un minimum de 10 minutes. La fluorescence à 665 nM est mesurée avec un lecteur de plaques Wallac Victor en utilisant une temporisation de 50 µs.
Méthode
La phosphorylation de VEGFR2 est évaluée dans HUVEC stimulée avec VEGF. Les HUVEC sont étalées dans des plaques de 10 cm recouvertes de collagène de type I dans du milieu Clonetics EGM-MV à 1,0-1,5 × 106 cellules/plaque. Après 24 heures, les cellules confluentes sont privées de sérum pendant une nuit en remplaçant le milieu de croissance par du milieu Clonetics EBM contenant 0,1% de BSA, 500 µg/mL d'hydrocortisone. Les cellules sont traitées avec du Pazopanib à différentes concentrations pendant 1 heure, suivi par l'ajout de 10 ng/mL de VEGF ou de véhicule pendant 10 min. Les cellules sont solubilisées dans du tampon de lyse. Le VEGFR2 est immunoprécipité à l'aide d'un anticorps antiflk-1 et analysé par électrophorèse sur gel de polyacrylamide dodécyl sulfate de sodium (SDS-PAGE) suivie d'un Western blot et d'une détection avec antiflk-1 ou avec un anticorps antiphosphotyrosine (anti-P-tyr-biotine). Le niveau de phosphorylation de VEGFR2 est quantifié par densitométrie et normalisé au niveau total de VEGFR2.

Groupes de Produits : Protéine Tyrosine Kinase > Inhibiteur VEGFR